Genètica Molecular Humana II

1. Diagnòstic genètic-molecular mitjançant la identificació de mutacions causals de IRDs per seqüenciació massiva de exomes (WES) i gens candidats (target gene sequencing)
2. Anàlisi funcional de gens candidats, com ATXN3 (causatiu d'atàxia MJD), NR2E3 (factor de transcripció necessari per diferenciació de fotoreceptors), i CERKL (gen descobert pel nostre grup i de funció desconeguda) en models cel·lulars i animals. Per a això, hem generat models de sobre-expressió i silenciament gènic en cèl·lules en cultiu, així com animals knockdown (peix zebra), ratolins knockout mitjançant sistema cre/loxP i ratolins generats per edició gènica CRISPR / CAS9 en els quals estem estudiant el seu fenotip a nivell electrofisiològic, molecular i cel·lular
3. També col·laborem amb grups reconeguts per generar organoides a partir de cèl·lules iPSCs derivades de controls i pacients per estudiar les bases moleculars de la ceguesa en un model fisiològic.

1. Identificar nous gens causatius de distròfies hereditàries mitjançant seqüenciació massiva.
2. Realitzar la recerca i disseny de noves aproximacions metodològiques per a la millora de el diagnòstic genètic en casos difícils (detecció de CNVs, identificació de mutacions deep-intronic i en promotors, anàlisi d'ADN mitocondrial i heteroplàsmia ...)
3. Dur a terme l'anàlisi funcional de noves variants genètiques identificades en les malalties que s'estudien a les nostres línies d'investigació.
4. Establir les bases moleculars de la progressió de la malaltia en models organotípics de ratolins model i en organoides generats a partir de cèl·lules iPSCs. Anàlisi fenotípic dels ratolins generats per diferents metodologies.
5. Desenvolupar estudis fenotípics de la retina de models animals mitjançant microscòpia d'alta resolució.
6. Explorar com a prova de principi d'una possible teràpia gènica, l'eficiència de la transferència gènica i el rescat fenotípic en retina de ratolí mitjançant nanopartícules.

El punt fort del nostre grup de recerca és el nostre coneixement de les causes genètiques i moleculars de la degeneració retiniana en la ceguesa hereditària. La nostra especialitat és tant la priorització de variants genètiques després seqüenciació massiva (WES i target gene sequencing) per a la identificació de mutacions, com la capacitat per efectuar l'anàlisi funcional de les mutacions identificades, ja sigui en models cel·lulars o animals. Per a això, podem efectuar des transfeccions per sobre-expressió o silenciament gènics, inmunodeteccions, immunohistoquímica, co-immunoprecipitació, modificacions post-traduccionals i anàlisi d'imatge. També fem servir tècniques d'obtenció de RNA i d'anàlisi d'expressió per RT-PCR quantitativa a temps real, d'anàlisi de splicing alternatius i d'efectes de mutacions deep-intronic. També tenim experiència en cultius neuronals primaris i de explants de teixit, generació de transgènics en embrions de peix zebra i transgènics temporals per microinjecció subretinal en retina de ratolí.

La nostra especialització se centra en la genètica i biologia molecular de les malalties de la visió hereditàries, en concret les que causen neurodegeneració retiniana.